El experimento se desarrolló en áreas de
investigación (22°24´48´´ N y 83°41´16´´ O) de la Facultad de Ciencias
Forestales y Agropecuarias en la Universidad de Pinar del Río, Cuba.
La siembra se realizó en bandejas de
40 tubetes con capacidad para 70 cm3 cada uno. Se utilizaron
semillas certificadas de tomate cv. ‘Ulises’
y se establecieron cuatro tratamientos sobre un diseño completamente al azar (Tabla
1).
Tabla 1
Tratamientos
evaluados en el experimento
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No.
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Descripción de los
tratamientos
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Etiquetas
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1
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Plántulas
de tomate cv. ‘Ulises’ sin inoculaciones (control)
|
C
|
|
2
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Plántulas
de tomate cv. ‘Ulises’ con inoculación de T. viride «cepa
Ts-3»
|
T
|
|
3
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Plántulas
de tomate cv. ‘Ulises’ con inoculación de extracto acuoso
de A. indica (5% m/v)
|
N
|
|
4
|
Plántulas
de tomate cv. ‘Ulises’ con inoculaciones de T. viride
y extracto acuoso de A. indica
|
T+N
|
Se empleó como sustrato una mezcla de suelo
Ferralítico Amarillento (Hernández et al., 2015), turba y cascarilla de arroz
(70% + 20% + 10 %), con pH(KCl)= 6,30, MO= 23,9 y CE= 0,81. La
desinfección se realizó con formalina (4,0%) durante 72 horas, cinco días antes
de la siembra. Las condiciones experimentales se caracterizaron por tempera-turas
de 18,2-28,9 °C y humedad relativa de 57%-68%.
El biopreparado de T. viride «cepa Ts-3» se obtuvo en el Centro de
Reproducción de Entomófagos y Entomopatógenos “La Conchita”, Pinar del Río, Cuba.
La calidad arrojó concentración de 1,2 x 109 UFC/mL, 100% de pureza y
96% de viabilidad. Cinco días después de la germinación, se aplicaron 10 mL/tubete
de solución conidial del biopreparado, obtenida por dilución en agua a una proporción
de 25 g/L.
En la preparación del extracto
acuoso de nim, se emplearon semillas de frutos recolectados en árboles ubicados
en zonas urbanas de Pinar del Río. Las semillas se sometieron a un proceso de
secado en condiciones de ambiente natural, hasta perder entre 90% y 95 % de humedad, según la metodología establecida en
Cuba (Estrada & Puig, 2013). Luego se trituraron,
en fracciones inferiores a 0,5 cm, 50 g/L (5% m/v) del material en agua
destilada durante ocho horas, agitándose 15 min a intervalos de 30 min en las primeras
2 h. Posteriormente, se filtró el extracto obtenido y se aplicaron 10 mL/tubete
10 días después de la germinación.
Las evaluaciones se realizaron 35 días después de
la germinación, momento en que fueron extraídas 20 plántulas al azar de cada
tratamiento y procesadas en el Laboratorio de Microbiología de la Universidad
de Pinar del Río. En ellas se midieron la longitud y diámetro del tallo (cm), número
de hojas, distancia entre nudos (cm) y masas fresca y seca totales (g). Para
ello se empleó un pie de Rey digital (precisión 0,01 mm) y una balanza técnica
digital (precisión 0,01 g).
Los datos obtenidos se procesaron
mediante análisis de varianza simple y prueba de Duncan para la comparación de
medias, con un nivel de confianza del 95% (p ≤ 0,05).
También se clasificaron los
tratamientos mediante análisis discriminante. Se empleó el software estadístico
Minitab® (Minitab, 2015), versión 17.1.0 para Windows.
En los tratamientos C, T y T+N se alcanzaron
valores similares de longitud del tallo, número de hojas y distancia entre
nudos, en las plántulas de tomate cv. ‘Ulises’;
mientras que, la aplicación de extracto acuoso de semillas de nim (N) provocó
valores significativamente inferiores, llegando a reducir en más del 25% la
longitud del tallo respecto al control, aunque, también afectó el diámetro del
tallo (Tabla 2).
Tabla 2
Características morfológicas de las plántulas de
tomate cv. ‘Ulises’ en los tratamientos
evaluados
|
Tratamientos
|
LT
(cm)
|
DT
(cm)
|
NH
(u)
|
DEN (cm)
|
|
C
|
12,64 a
|
3,87 a
|
4,19 a
|
2,78 a
|
|
T
|
12,52 a
|
3,67 b
|
4,43 a
|
2,61 a
|
|
N
|
9,34 b
|
2,84 c
|
3,75 b
|
1,73 b
|
|
T+N
|
11,89 a
|
3,86 a
|
4,61 a
|
2,46 a
|
|
ESx
|
0,19
|
0,05
|
0,08
|
0,08
|
LT= Longitud del tallo, DT= Diámetro del tallo, NH=
Número de hojas, DEN= Distancia entre nudos.
Letras distintas en una misma columna indican
diferencias significativas (Duncan; p ≤ 0,05).
Estudios similares destacan que la aplicación de
extracto acuoso de hojas de nim no afectó el crecimiento en plántulas de tomate
cv. ‘PR-92’
(Santana et al., 2016a), lo que evidencia la posibilidad de un efecto
diferenciado entre los extractos. No obstante, su verdadero efecto de estos
sobre el crecimiento de las plantas pudiera estar relacionado con el cultivar
empleado, la dosis y concentración de los extractos, así como el momento de
aplicación, entre otros factores.
Otros resultados indican que la utilización de
desechos de nim, como alternativa de biodesinfección de suelo, no provoca
afectación significativa en la longitud del tallo de plantas de tomate cv.
‘Campbell 28’,
aunque los valores promedios de esta variable tienen a disminuir con el
incremento de la dosis de desechos empleada (Rodríguez et al., 2012).
Los resultados obtenidos sugieren un efecto
negativo del extracto de semillas de nim (N) sobre las variables de crecimiento
de tomate cv. ‘Ulises’; sin embargo, este efecto
se suprime en plántulas inoculadas con Trichoderma (T+N), pues se obtuvieron
valores similares al control en las variables analizada (Tabla 2), ello pudiera
estar asociado a la capacidad de Trichoderma como agente biodegradante (Valdés,
2014) que
permita atenuar algunos
metabolitos secundarios contenidos en el extracto y, por consiguiente, su
reconocido efecto inhibidor sobre el crecimiento de las plantas (Souza et al.,
2016).
Con relación al efecto de T. viride «cepa Ts-3» no se encontraron incrementos significativos
en las variables morfológicas de las plántulas de tomate cv. ‘Ulises’ (Tabla 2), aunque varios autores aseguran que Trichoderma
puede actuar como bioestimulante (Stewart & Hill, 2014; Santana et al.,
2016); sin embargo, este
efecto suele no
ocurrir en todos los vegetales y puede variar entre especies y cepas de Trichoderma
(Gómez et al.,
2013; Al-Hazmi & TariqJaveed,
2016; Bader et
al., 2020).
Algunas experiencias
recientes informan incrementos en la longitud del tallo de plántulas de tomate
inoculadas con T. asperellum (cepa Ta 90) y T. harzianum (cepa
A-34) (Hernández-Ochandía et al., 2015; Santana et al., 2017).
Los valores promedios de masa fresca y seca
totales, en las plántulas de tomate cv. ‘Ulises’, superaron los 3,0 y 0,20
g, respectivamente; sin embargo, todas las variables de biomasa (Figura 1) se redujeron
significativamente con la aplicación de extracto acuoso de semillas de nim (N).
Este resultado
puede estar relacionado con el efecto perjudicial de los extractos de nim sobre
el crecimiento radical (Moosavi, 2012; Ritter et al., 2014), reflejándose en
una disminución de la actividad fisiológica de las plántulas.
Figura 1. Valores promedios de
biomasa fresca y seca en plántulas de tomate cv. ‘Ulises’. Letras distintas en
las columnas de cada variable indican diferencias significativas (Duncan; p ≤
0,05).
La reducción de la masa fresca total (47,9%) y masa seca total
(52,0%), en las plántulas de tomate cv. ‘Ulises’, supera la media informada
por otros autores en el
cultivar «PR-92» (< 10%)
cuando aplicaron extracto acuoso
de hojas de nim (Santana et
al., 2017). Se demuestra con ello el
efecto fitotóxico del extracto de semillas de nim sobre el cultivar empleado en
esta investigación, aspecto que debe profundizarse en próximos ensayos,
valorando el potencial alelopático en plantas arvenses para su posible empleo
como alternativa de manejo de estas en escenarios de la agricultura urbana y
suburbana.
La masa seca total, en el tratamiento T+N, fue
significativamente superior a la obtenida en el extracto de semillas de nim
(N), evidenciándose que la combinación con T. viride «cepa
Ts-3»
atenúa el efecto negativo del extracto, seguramente debido al incremento
significativo de la masa fresca radical en las plántulas de tomate cv. ‘Ulises’ inoculadas con Trichoderma (T y T+N), resultado
que podría justificar
la aplicación combinada de estas alternativas de manejo de plagas.
El incremento de la masa fresca radical en las
plántulas tratadas con T. viride «cepa Ts-3»
corrobora que el
aumento de la raíz y/o biomasa foliar es la expresión más común de la promoción
del crecimiento inducida por especies de Trichoderma (Stewart & Hill, 2014),
además, existen ejemplos recientes que informan incrementos en la biomasa de
plantas de tomate con inoculaciones de Trichoderma spp. (Pinzón et al., 2015,
Hernández-Ochandía et al., 2015; Al-Hazmi & TariqJaveed, 2016).
El método multivariante de clasificación mediante
análisis discriminante (Figura 2) arrojó que los tratamientos C, T y T+N
presentaron mayor asociación en los valores positivos de la primera función
discriminante canónica, con un solapamiento de casos que alcanza hasta 35%.
La primera función explicó el 87,9% de las
diferencias entre estos tratamientos y el extracto acuoso de semillas de nim
(N), que mostró tendencia a puntuaciones negativas, corroborán-dose su efecto negativo sobre
las variables morfofisiológicas de las plántulas de tomate cv. ‘Ulises’. Además, se observa que
las plántulas de tratamiento N se distinguen claramente de las obtenidas en los
tratamientos C, T y T+N que fueron similares entre sí.
Este resultado sugiere la posibilidad de combinar
la utilización de T. viride «cepa Ts-3» con
extracto acuoso de semillas de nim, aunque podría profundizarse, en próximos
ensayos, sobre la concentración y momento de aplicación más adecuados del
extracto.
Figura 2. Diagrama de dispersión de
los tratamientos en las dos primeras funciones discriminantes.
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https://orcid.org/0000-0003-3793-7828 A. Acosta Hernández: 
https://orcid.org/0000-0003-4018-4986 Y. Rivera Regalado: 