Caracterización molecular de bacterias endofíticas de Elodea potamogeton (“llachu”) del Lago Titicaca
DOI:
https://doi.org/10.17268/manglar.2021.038Resumen
El objetivo fue aislar y caracterizar molecularmente bacterias endofíticas del “llachu”, planta acuática del Lago Titicaca que sobrevive en ambientes hipereutrofizados. Para el aislamiento, las muestras fueron desinfectadas en alcohol 70%, hipoclorito de sodio 0,5% y Tween 80%; luego, se homogenizaron y una alícuota sembrada en medio Luria-Bertani (LB). Se eligieron tres cepas para su resembrado en agar LB sólido. De las cepas puras, se extrajo DNA con la mezcla fenol-cloroformo-alcohol isoamílico. Se amplificó el gen 16S rDNA por PCR; los amplicones se remitieron para su secuenciamiento. Las secuencias se editaron con BioEdit 7.0.0 y se eligieron secuencias similares con BLASTn del GenBank, se hizo el alineamiento múltiple de secuencias con Clustal W. Para las relaciones evolutivas se utilizó el MEGA7 construyéndose árboles filogenéticos por el método de Neighbor-Joining. El análisis molecular demuestra que la cepa Sample10ped corresponde a Pantoea sp. con una identidad superior al 76%; la cepa Sample11pe a Pseudomonas sp. con un 100% de identidad; y, a la cepa Sample12ped a Raoultella terrigena sp. o Klebsiella sp. con una identidad de 99%. Las secuencias de las dos últimas, fueron registradas en el GenBank.
Citas
Alvarado-Marchena, L., Schmidt-Durán, A., Alvarado-Ulloa, C., Chacón-Cerdas, R., & Flores-Mora, D. (2016). Molecular characterization of the endophytic bacteria found in the fig crops (Ficus carica var . Brown Turkey) in Costa Rica. ARPN Journal of Agricultural and Biological Science, 11(7), 290–297.
Arenas, N. E., Gutiérrez, A. J., Salazar, L. M., Polanco, J. C., & Gómez, A. (2009). Construcción de una filogenia molecular para las especies de los géneros Klebsiella y Raoultella basada en los genes ARNr 16S y ARN polimerasa subunidad. Revista Ciencias de La Salud, 7(2), 22–29.
Beltrán, D. F., Palomino, R. P., Moreno, E. G., Peralta, C. G., & Montesinos-Tubée, D. B. (2015). Calidad de agua de la bahía interior de Puno, lago Titicaca durante el verano del 2011. Revista Peruana de Biología. Biol, 22(3), 335–340.
Brisse, S., Grimont, F., & Grimont, P. (2006). The genus Klebsiella. In The Prokaryotes (Vol. 6, pp. 159–196).
Compant, S., Reiter, B., Sessitsch, A., Nowak, J., Clément, C., & Barka, E. (2005). Endophytic Colonization of Vitis vinifera L. by Plant Growth-Promoting Bacterium Burkholderia sp. Strain PsJN. Appl. Environ. Microbiol., 71(4), 1685–1693.
Conn, V. M., & Franco, C. M. M. (2004). Analysis of the Endophytic Actinobacterial Population in the Roots of Wheat (Triticum aestivum L.) by Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism and Sequencing of 16S rRNA Clones. Appl. Environ. Microbiol., 70(3), 1787–1794.
Cordero, J., Ortega-Rodes, P., & Ortega, E. (2008). La inoculación de plantas con Pantoea sp., bacteria solubilizadora de fosfatos, incrementa la concentracion de P en los tejidos foliares. Rev. Colomb. Biotecnol, X(1), 111–121.
de Oliveira Costa, L. E. E. de O., de Queiroz, M. V., Borges, A. C., de Moraes, C. A., & de Araújo, E. F. (2012). Isolation and characterization of endophytic bacteria isolated from the leaves of the common bean (Phaseolus vulgaris). Brazilian Journal of Microbiology, 43(4), 1562–1575.
Devi, K. A., Pandey, G., Rawat, A. K. S., Sharma, G. D., & Pandey, P. (2017). The endophytic symbiont-Pseudomonas aeruginosa stimulates the antioxidant activity and growth of Achy-ranthes aspera L. Frontiers in Microbiology, 8(SEP), 1–14.
Guevara, J., Castañeda, I., Juárez, J., & Mendoza, A. (2013). Efecto de la temperatura y del pH sobre el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa MBLA-04 en solución mínima de sales con detergente Ace. Revista Rebiol, 33(1), 1–8.
Hall, T. A. (1999). BioEdit: A User-Friendly Biological Sequence Alignment Editor and Analysis Program for Windows 95/98/NT. Nucleic Acids Symposium Series, 41, 95–98.
Iniguez, A. L., Dong, Y., & Triplett, E. W. (2004). Nitrogen fixation in wheat provided by Klebsiella pneumoniae 342. Molecular Plant-Microbe Interactions, 17(10), 1078–1085.
Kumar, S., Stecher, G., & Tamura, K. (2016). MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 7.0 for bigger datasets Sudhir. Mol Biol Evol., 33(7), 1870‐1874.
Lara-Cortés, E., Bautista- Baños, S., Barrera-Necha, L. L., Hernández-Zárate, G., & León- Rodríguez, R. (2019). Detección e identificación molecular de Pantoea vagans en flores de Dahlia sp. TIP Revista Especializada En Ciencias Químico-Biológicas, 22, 1–8.
Li, J. H., Wang, E. T., Chen, W. F., & Chen, W. X. (2008). Genetic diversity and potential for promotion of plant growth detected in nodule endophytic bacteria of soybean grown in Heilongjiang province of China. Soil Biology and Biochemistry, 40(1), 238–246.
Luo, T., Ou-Yang, X. Q., Yang, L. T., Li, Y. R., Song, X. P., Zhang, G. M., Gao, Y. J., Duan, W. X., & An, Q. (2016). Raoultella sp. strain L03 fixes N2 in association with micropropagated sugarcane plants. Journal of Basic Microbiology, 56, 1–7.
Montero, M. M. (2012). Pseudomonas aeruginosa multiresistente: aspectos epidemiológicos, clínicos y terapéuticos [Universitat Autónoma de Barcelona].
Munif, A., Hallmann, J., & Sikora, R. (2012). Isolation of Endophytic Bacteria from Tomato and Their Biocontrol Activities against Fungal Diseases Bacteria from Tomato and Their Biocontrol Activities against Fungal Diseases. Microbiology Indonesia, 6(4), 148–156.
Nair, D. N., & Padmavathy, S. (2014). Impact of endophytic microorganisms on plants, environment and humans. The Scientific World Journal, 2014(March).
Pérez, A., & Chamorro, L. (2012). Bacterias endófitas: una alternativa biologica para el control de burkholderia glumae en el cultivo del arroz en colombia. Revista Colombiana de Ciencia Animal -, 4(1), 172–184.
Rosenblueth, M., & Martínez-Romero, E. (2006). Bacterial endophytes and their interactions with hosts. Molecular Plant-Microbe Interactions, 19(8), 827–837.
Saitou, N., & Nei, M. (1987). The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution, 4(4), 406–425.
Sakiyama, C. C. H., Paula, E. M., Pereira, P. C., Borges, A. C., & Silva, D. O. (2001). Characterization of pectin lyase produced by an endophytic strain isolated from coffee cherries. Letters in Applied Microbiology, 33(2), 117–121.
Sambrook, J., & Russell, D. W. (2006). Purification of Nucleic Acids by Extraction with Phenol:Chloroform. Cold Spring Harbor Protocols, 2006(1), pdb.prot4455.
Schicklberger, M., Shapiro, N., Loqué, D., Woyke, T., & Chakraborty, R. (2015). Draft genome sequence of Raoultella terrigena R1Gly, a diazotrophic endophyte. Genome Announcements, 3(3), 1–2.
Sessitsch, A., Howieson, J. G., Perret, X., Antoun, H., & Martínez, E. (2002). Advances in Rhizobium Research. Critical Reviews in Plant Sciences, 21(4), 323–378.
Tamura, K., Nei, M., & Kumar, S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 101(30), 11030–11035.
Vincent, J. M. (1970). A Manual for the Practical Study of the Root-Nodule Bacteria. In IBP Handbook No. 15, Blackwell Scientific Publishers, Oxford. Wiley.
Wang, E. T., Tan, Z. Y., Guo, X. W., Rodríguez-Duran, R., Boll, G., & Martínez-Romero, E. (2006). Diverse endophytic bacteria isolated from a leguminous tree Conzattia multiflora grown in Mexico. Archives of Microbiology, 186(4), 251–259.
Publicado
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Derechos de autor 2022 Pedro Ubaldo Coila Añasco, Julio César Bernabé Ortiz, Domingo Alberto Ruelas Calloapaza
Esta obra está bajo una licencia internacional Creative Commons Atribución 4.0.
Manglar is an open access journal distributed under the terms and conditions of Creative Commons Attribution 4.0 International license
